CARACTERISATION DE BACTERIOCINES ANTI-LISTERIA PRODUITES PAR DES SOUCHES LACTIQUES ISOLEES A PARTIR DU LAIT DE CHAMELLE

Abstract

Les bactériocines sont des molécules anti-microbiennes de nature peptidique, de poids moléculaire généralement inférieur à 10 Kda. Elles sont produites par des bactéries et actives contre des souches phyllogénétiquement proches. Notre travail a porté sur la caractérisation de bactériocines anti-listeria, produites par des souches lactiques appartenant aux genres lactococcus et lactobacillus isolées à partir du lait camelin. Dans un premier temps, nous avons testé le pouvoir bactériocinogène de nos souches par la méthode de diffusion des puits, suivi du test d’inactivation aux protéases. Les souches ayant donné de meilleures zones d’ihnibition ont été séléctionnées, il s’agit de trois souches de lactococcus : lactococcus lactis ssp lactis, lactococcus lactis ssp raffinolactis, lactococcus lactis ssp lactis, et d’un lactobacille : lactobacillus brevis/buchnerii. Par la suite, les peptides anti-bactériens produits par ses souches sont extraits par la méthode d’adsorption/désorption, puis séparés par une PAGE-SDS et leur activité est détectée par la technique du zymogramme. Nous avons réalisé, d’autre part, une caractérisation génétique de ces molécules. Nous avons procédé par la méthode de cure plasmidique par la rifampicine et la novobiocine. La cure est vérifiée par l’extraction de l’ADN plasmidique suivie d’une migration sur gel d’agarose. Les mutants Bacobtenus ont subi les tests d’activité par la méthode de diffusion des puits ainsi que par la technique du zymogramme, en utilisant comme témoin positif, les souches sauvages Bac+. Les 4 souches ont donné des zones d’ihnibition à l’égard de la souche cible listeria innocua F, avec des activités plus fortes, exprimées par les deux souches : lactococcus lactis ssp lactis et lactococcus lactis ssp lactis. La disparition des zones d’ihnibition après la cure des plasmides, confirme l’origine plasmidique des bactériocines produites par les souches de lactococcus.