Investigation phytochimique et caractérisation des activités biologiques sur des extraits bioactifs de Pergularia tomentosa issue de sud d’Algérie

Abstract

Ce travail est consacré à l'étude phytochimique et biologique d'une plante Algérienne appartenant à la famille d’Asclepiadaceae nommée Pergularia tomentosa. Les tests Phytochimique qui ont été réalisés sur les extraits brut de feuilles et de tiges, a montré que cette plante est riche en différents métabolites secondaires. Cinq extraits de feuilles et de tiges ont été obtenus en utilisant différents solvants de polarité croissante. L'évaluation des teneurs en composés phénoliques totaux (TPC), en flavonoïdes (TFC) et en tanins (TTC) a montré que les extraits de feuilles ont une teneur élevée en TPC, TFC et TTC par rapport aux extraits de tiges. Le test du pouvoir réducteur du molybdène Mo (VI) et de DPPH ont été réalisé afin de mesurer la capacité antioxydante des différents extraits de tiges et de feuilles. Les extraits de feuilles donnent également la meilleure capacité antioxydante. L’activité antidiabétique in vitro a été réalisée sur certains extraits de feuilles et de tiges en utilisant la méthode d'inhibition de l'enzyme -amylase La toxicité aiguë, l’activité anti-inflammatoires et l’activité sédatives ont été réalisées afin d'évaluer l'activité biologique in vivo des extraits aqueux et brut de P. tomentosa, en utilisant des souris albinos mâles et femelles. L'administration orale des extraits à une dose unique de 2000 mg/kg n'a provoqué aucun symptôme d'intoxication chez tous les animaux traités. En revanche, cette administration orale inhibe le développement de l'oedème de la patte avec un pourcentage d'inhibition estimé à 77.25% pour l’extrait aqueuse. De plus, cette administration a également réduit le mouvement de l'animal traité avec un pourcentage de réduction de mouvement de 60,00 % pour l'extrait brut; ces résultats indiquent que ces extraits ont une bonne activité anti-inflammatoire et sédative. Afin d'isoler les alcaloïdes de P. tomentosa, l'extraction spécifiques d'alcaloïdes, l'isolement et le purification de ces composés ont été effectués. L'isolement et la purification ont été réalisés en utilisant différentes méthodes chromatographiques qui sont : colonne de gel de silice, colonne C18, CCM et CCMP. Cette investigation phytochimique nous a conduit à obtenir 26 alcaloïdes purs. Les structures chimiques des cinq alcaloïdes ont été déterminée à l'aide d'expériences de NMR (1H, 13C, HSQC, HMBC et COSY). Tous ces composés sont rapportés dans notre étude pour la première fois en tant que de nouveaux composés. L'étude phytochimique des extraits combinés de butanol et d'acétate d'éthyle à l'aide de différentes méthodes chromatographiques telles que la colonne de gel de silice, la colonne Sephadex LH-20, la colonne C18, la CCM et la CCMP, nous a conduit à obtenir 5 cardénolidesglycosidiques, 2 flavonoïdes et 1 composé phénolique. Les structures chimiques de 6 composés ont été déterminées à l'aide de différentes méthodes d'analyse spectroscopique RMN (1H, 13C, DEPT135, DEPT90, HSQC, TOCSY-HSQC, HMBC et COSY). Parmi ces composés, 4 composés sont isolés pour la première fois en tant que nouveaux composés.

خصص هذا العمل للدراسة الفيتو كيميائية والبيولوجية للنبات الجزائري الذي ينتمي إلى عائلةAsclepiadaceaeالمسمىPergularia tomentosa. وقدأظهر الفحص الكيميائي النباتي الذي تم إجراؤه على المستخلصات الخام للأوراقوالسيقان أن هذا النبات غني بمختلف منتجات الايض الثانوي. تمكنا من الحصول على خمس مستخلصات للأوراقواخرى للسيقان باستخدام مذيبات ذات قطبية متزايدة. أظهرت نتائج تجارب تحديد محتويات الفينولات الكلية (TPC)، الفلافونويدات (TFC) والعفصيات (TTC) أن مستخلصات الأوراق تحتوي على نسبة عالية من TPC، TFCوTTC مقارنة بمستخلصات السيقان. خلال هذه الدراسة قمنابإجراء اختبار القدرة الارجاعية للموليبدينوم(VI) واختبار DPPH من أجل قياس نشاط مضادات الأكسدة للمستخلصات المختلفة للسيقان والأوراق. اظهرت مستخلصات الأوراق أيضًا قدرة مضادة للأكسدة جيدة مقارنة بتلك التي أظهرتها مستخلصات السيقان. كما قمنا كذلكبإجراء اختبار الفعالية المضاد للسكري في المختبر على بعض مستخلصات الأوراق والسيقان باستخدام طريقة تثبيط إنزيم الفا-أميلاز. من اجل دراسة الفعالية البيولوجية في الجسم الحي للمستخلصين المائي والخام لنبات P.tomentosa، قنا بإجراء تجارب تحديد السمية الحادة والفعالية المضادة للالتهابات بالإضافة الى الفعالية المسكنة للنشاط الحركي، باستخدام مجموعة من الفئران البيضاء من جنس ذكور وإناث. التجريع الفموي للمستخلصين بجرعة وحيدة مقدارها 2000 ملغ / كغ لم يسبب أي أعراض تسمم لدى جميع الحيوانات المعالجة. من ناحية أخرى، فإن هذهالجرعة تثبط تطور وذمة القدم مع نسبة تثبيط تقدر بـ 77.25٪ بالنسبة المستخلص المائي. بالإضافة إلى ذلك، قللت هذه المستخلصات أيضًا من حركة الحيوان المعالج بنسبة انخفاض في الحركة تقدر بـ 60.00٪ للمستخلص الخام. تشير هذه النتائج إلى أن هذه المستخلصات لها نشاط مضاد للالتهابات ونشاط مهدئ جيد. من اجل عزل القلويدات من نبات P. tomentosa، تمكنا من اجراءاستخلاص نوعي لها وعزلها وتنقيتها. العزل والتنقية لهذه المركبات تم باستخدام طرق كروماتوغرافيا مختلفة وهي: عمود هلام السيليكا، عمود C18، كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة التحليليةوالتحضيرية. مكننا هذا التحليل الفيتو كيميائي من الحصول على ستة وعشرون قلويدا نقيا. تمكنا من تحديد التركيب الكيميائي لخمس قلويدات باستخدام تجارب الرنين المغناطيسي النووي (RMN1H، RMN13C، HSQC، HMBCوCOSY).يعتبر فصل جميع هذه المركبات في دراستنا لأول مرة كمركبات جديدة. الدراسة الفيتو كيميائية لمجموع مستخلصي البوتانول وخلات الإيثيل باستخدام مختلف الطرقالكروماتوغرافيا مثل عمود هلام السيليكا، عمود سيفاديكس LH-20، عمود C18، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة التحليليةوالتحضيرية؛ مكنتنا من الحصول على خمس جليكوسيدات الكاردينوليد، ومركب فلافونويدي ومركب فينولي.تمكنا من تحديد البنى الكيميائيائية لستة مركبات باستخدام مختلف طرق التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي (RMN1H ، RMN13C ، DEPT135، DEPT90، HSQC، TOCSY-HSQC، HMBCوCOSY). 4 مركبات من بين المركبات المعزولة تم عزلها لأول مرة كمركبات جديدة.