Investigation phytochimique et caractérisation des activités biologiques sur des extraits bioactifs de Pergularia tomentosa issue de sud d’Algérie

Abstract

This work is devoted to the phytochemical and biological study of the Algerian plant belonging to Asclepiadaceae family named Pergularia tomentosa. The Phytochemical screening which was performed on leaves and stems crud extracts, showed that this plant is rich of various secondary metabolites. Five leaves and five stems extracts were obtained using different solvent with increasing polarity. The assessment of the total phenolics (TPC), flavonoids (TFC) and tannins (TTC) contents showed that the leaves extracts have high contain of TPC, TFC and TTC compared with stems extracts. Reducing power of molybdenum Mo (VI) and DPPH assays were employed in order to measure antioxidant capacity of the different stems and leaves extracts. The leaves extracts also give the best antioxidant capacity. In vitro anti-diabetic activity was carried out on some leaves and stems extracts using inhibition of -amylase enzyme method. Acute toxicity, anti-inflammatory and sedative activities were performed in order to evaluate in vivo biological activity of both aqueous and crud extracts of P.tomentosa, using male and female albino mice. Oral administration of the extracts at single dose of 2000 mg/kg did not cause any symptoms of intoxication in all animals treated. In the other hand, this oral administration inhibits the development of paw edema with a percentage of inhibition estimated by 77.25% for aqueous extract. As well as, this administration also reduced the movement of the animal treated with percentage of reduction of movement of 60.00 % for crude extract; these results indicate that these extracts have good anti-inflammatory and sedative activities. In order to isolate alkaloids from P.tomentosa, specific alkaloids extraction, isolation and purification were performed. The isolation and purification were performed using different chromatographic methods which are: silica gel column, C18 column, TLC and PTLC. This phytochemical investigation led us to obtain 26 pure alkaloids. Chemical structure of 5 alkaloids were determined using NMR experiments (1H, 13C, HSQC, HMBC and COSY). All these compounds are reported in our study for the first time as new compounds. The phytochemical study of combine butanol and ethyl acetate extracts using different chromatographic methods such as silica gel column, Sephadex LH-20 column, C18 column, TLC and PTLC, led us to obtain 5 cardenolide glycosides, 2 flavonoids and 1 phenolic compound. The chemical structures of 6 compounds were determined using Abstract VII different NMR spectroscopic analysis methods (1H, 13C, DEPT135, DEPT90, HSQC, TOCSY-HSQC, HMBC and COSY). Among those compounds, 4 compounds are isolated for the first time as new compounds.

Ce travail est consacré à l'étude phytochimique et biologique d'une plante Algérienne appartenant à la famille d’Asclepiadaceae nommée Pergularia tomentosa. Les tests Phytochimique qui ont été réalisés sur les extraits brut de feuilles et de tiges, a montré que cette plante est riche en différents métabolites secondaires. Cinq extraits de feuilles et de tiges ont été obtenus en utilisant différents solvants de polarité croissante. L'évaluation des teneurs en composés phénoliques totaux (TPC), en flavonoïdes (TFC) et en tanins (TTC) a montré que les extraits de feuilles ont une teneur élevée en TPC, TFC et TTC par rapport aux extraits de tiges. Le test du pouvoir réducteur du molybdène Mo (VI) et de DPPH ont été réalisé afin de mesurer la capacité antioxydante des différents extraits de tiges et de feuilles. Les extraits de feuilles donnent également la meilleure capacité antioxydante. L’activité antidiabétique in vitro a été réalisée sur certains extraits de feuilles et de tiges en utilisant la méthode d'inhibition de l'enzyme -amylase La toxicité aiguë, l’activité anti-inflammatoires et l’activité sédatives ont été réalisées afin d'évaluer l'activité biologique in vivo des extraits aqueux et brut de P. tomentosa, en utilisant des souris albinos mâles et femelles. L'administration orale des extraits à une dose unique de 2000 mg/kg n'a provoqué aucun symptôme d'intoxication chez tous les animaux traités. En revanche, cette administration orale inhibe le développement de l'œdème de la patte avec un pourcentage d'inhibition estimé à 77.25% pour l’extrait aqueuse. De plus, cette administration a également réduit le mouvement de l'animal traité avec un pourcentage de réduction de mouvement de 60,00 % pour l'extrait brut; ces résultats indiquent que ces extraits ont une bonne activité anti-inflammatoire et sédative. Afin d'isoler les alcaloïdes de P. tomentosa, l'extraction spécifiques d'alcaloïdes, l'isolement et le purification de ces composés ont été effectués. L'isolement et la purification ont été réalisés en utilisant différentes méthodes chromatographiques qui sont : colonne de gel de silice, colonne C18, CCM et CCMP. Cette investigation phytochimique nous a conduit à obtenir 26 alcaloïdes purs. Les structures chimiques des cinq alcaloïdes ont été déterminée à l'aide d'expériences de NMR (1H, 13C, HSQC, HMBC et COSY). Tous ces composés sont rapportés dans notre étude pour la première fois en tant que de nouveaux composés. L'étude phytochimique des extraits combinés de butanol et d'acétate d'éthyle à l'aide de différentes méthodes chromatographiques telles que la colonne de gel de silice, la colonne Sephadex LH- 20, la colonne C18, la CCM et la CCMP, nous a conduit à obtenir 5 cardénolides

IX glycosidiques, 2 flavonoïdes et 1 composé phénolique. Les structures chimiques de 6 composés ont été déterminées à l'aide de différentes méthodes d'analyse spectroscopique RMN (1H, 13C, DEPT135, DEPT90, HSQC, TOCSY-HSQC, HMBC et COSY). Parmi ces composés, 4 composés sont isolés pour la première fois en sumétant que nouveaux composés.